Micro-RNA şi Cancerul Pulmonar

                                        Micro-RNA şi Cancerul Pulmonar

                      Popescu Iulian medic primar pneumolog,doctor în ştiinţe medicale

                               Secţia clinică de radiobiologie Institutul Clinic Fundeni

                                                  popdociul@yahoo.com

                      Dr. Alina Halpern medic primar pneumolog

                                Spitalul Sf.Ştefan Bucureşti

                 Cercetarea markerilor tumorali pentru diagnosticul cancerelor prin metode non-invazive este în plină desvoltare,iar studiul serului şi al plasmei este supus unor cercetări extinse.(1,2 ,3, 4, 5)

                 Micro RNA sunt o clasă de molecule mici RNA, non- proteice, care nu codifică, cu 21-23 nucleotizi,endogeni cu un singur braţ(6) şi care reglează ,expresia

 genei ţintă, post-transcripţional.(7,8,9). La om s-a estimat  că sunt peste 1000 de

miRNA în genom,care reglează aproximativ 60% din toate genele,care codifică proteinele((10,11, 12)

miRNA circulanţi se găsesc în ser, plasmă ,sânge global(13,14) şi sunt relativ uşor de evidenţiat.

Acest lucru a dus la creşterea continuă a studiului miRNA circulanţi,ca biomarkeri

 stabil şi non-invazivi.

Până în prezent studiul markerilor pentru detecţia precoce este limitat((1,4,5) iar testul

pentru determinarea antigenului carcinoembrionic(CEA) are o sensibilitate şi specificitate scăzută,iar analiza proteomică,care îi este superioară pentru diagnostic, este greu de aplicat în clinică.

                                                        Biomarkeri circulanţi

Deoarece alţi biomarkeri cunoscuţi din fluide ca proteine(alfa fetoproteina-,chromogranin A, nuclear matrix 22, carbohydrat antigen 125.(15,16,17) şi enzime(prostata serum antigen şi human chorionic gonadotrofin)(19,20) au o specificitate şi o sensibilitate scăzută, devine

important  studiul biomarkerilor circulanţi în clasificarea tumorilor şi a prognosticului.

Expresia miRNA în circulaţie a fost identificată de CHIM et al  în 2008(10,21).

Biomarkerii circulanţi au următoarele caracteristici:

-sunt stabili în circulaţie şi rezistenţi la păstrare.

- majoritatea secvenţelor de miRNA sunt conservate la diferite specii.

-modificarea nivelelor miRNA în circulaţie sunt asociate cu cu diferite boli şi anumite stadii biologice şi patologice.

-nivelul miRNA poate fi determinat cu uşurinţă prin diferite metode.(10,22)

                                                    Originea microRNA circulanţi

Încă nu se ştie precis,dacă miRNA detectaţi în circulaţie rezultă prin decesul celulelor,prin liză sau prin secreţia celulelor tumorale. MicroRNA sunt rezistenţi la  factori externi(degradare enzimatică, condiţii externe ale pH(23,24),dar încă nu se cunoaşte,care este mecanismul,care protejează miRNA de degradare.

microRNA pot fi protejaţi în microvezicule sau în vezicule mari(50-150nm) de membrană de origine endocytică numiţi exosomi.(25,26)

Kosaka N et al(J.Biol. Chem 2010;285;17442-17452)  au arătat că întâi miRNA sunt încorporaţi în particule exosomale,după care, Ceramida celulară stimulează eliberarea din exosomi. Biosinteza Ceramidei este reglată de sfingomyelinază. Un inhibitor al sfingomyelinazei-GW4869- reduce, întrun mod  dependent de doză, miR-16 şi miR-146 extracelular,în timp ce nivelul celular rămâne nemodificat.

miRNA din exosomi pot fi livraţi celulelor, unde reduc la tăcere genele la fel ca şi microRNA celulari.(27)

Eliberarea microRNA în sânge,limfă,lapte este selectivă,selectivitate ,care se poate  corela cu malignitatea. Eliberaea miR-456 şi miR-1246 se face de către celulele maligne mamare,în timp ce celulele epiteliale mamare non-maligne reţin majoritatea miRNA.(28)

Deci cunoaşterea profilului al miRNAsecretori este o unealtă valabilă în diagnosticul cancerului şi al prognosticului său.

Nu se ştie încă mecanismul,care hotăreşte dacă miRNA este secretat sau reţinut de celulele tumorale.(6/36)(29). Se sugerează că celulele au un mecanism,care selectează miRNA specifici şi decid,cei care sunt eliberaţi şi cei care sunt reţinuţi.(28)

MicroRNA circulanţi par să reflecte fiecare aspect al stării fiziologice.

                                            Funcţia miRNA circulanţi

Se estimează că microRNA regleaază aproximativ 60% din genele .care codifică proteinele.

MicroRNA maturi reglează expresia genelor, prin legare de site-urile complementare.Gradul de complementaritate dintre miRNA şi ţintele lor,determină reglarea rezultatelor((30). MicroRNA se leagă de secvenţele mRNA, care codifică proteinele cu complementaritate.(31)

La mamifere predomină de regulă împerecherea incompletă între miRNA şi ţinta sa cu mRNA. În acest caz miRNA poate duce la inhibiţia expresiei acestei gene la nivelul translaţiei.(32,33) S-a identificat că miRNA inactivează expresia unor anumite gene-întrun mod specific acestei secvenţe,în loc de a o reduce la tăcere(34).

Recent  s-a găsit un nou mecanism-RNA activation-care introduce o nouă înţelegere a funcţiei miRNA,care pe lângă efectul inhibitor, miRNA poate promova expresia în anumite situaţii.

                             Efectele miRNA asupra biologiei celulare în tumorigeneză

Ele includ: proliferarea celulară,angiogeneza,apoptoza, metastaza, invazia şi alte procese biologice.

Astfel:

-grupul miR-17-92 promovează proliferarea,creşte angiogeneza şi susţine supravieţuirea celulară(35).

-familia LET-7,care este un subreglator în unele boli maligne,poate inhiba creşterea celulară prin ţintirea RAS şi HMGA2(high mobility group A2), care sunt reglatori cheie a căilor mitogene(36).

-miR-373 stimulează migraţia şi invazia  în celulele cancerului de sân.(Huang Q et al  Nat Cell Biol 2008;10:202-210)

-miR-125b inhibă apoptoza în celulele neuroblastomului  printrun mod dependent de p53.(36)

Aceste studii indică efectele cruciale  ale miRNA în carcinogeneză şi pot acţiona  fie ca oncogene ,fie ca tumor-supresoare.

MicroRNA circulanţi au roluri specifice dependente de origine.

Micro RNA sunt modulatori importanţi în angiogeneza tumorală.

Factorii pro-angiogenici:

-Grupul  miR-17-92(care include miR-19, miR-18a, miR-19a/b, miR-309 este legat de angiogeneză prin supra expresia acestui grup, care duce la creşterea angiogenezei prin semnalizare paracrină(37). Acest grup are o activitate angiogenică intrinsec celulară în celulele endoteliale(38).

-Alţi factori pro-angiogenici sunt miR-27b şi LET/f.(39,40)

-miRNA pot influenţa angiogeneza acţionând asupra celulelor endoteliale progenitoare(EPC). Ele joacă un rol în neovascularizaţie.

În schimb miR-34a  acţionează ca tumor-supresoare.

-Factori anti-angiogenici sunt miR-221 şi miR-222,care au o activitate în celulele endoteliale.

Astfel se reglează ciclul celular, senescenţa , apoptoza şi metabolismul(41,42).

Recent s-a arătat că supra expresia miR-34a şi EPC inhibă angiogeneza mediată de EPC

prin inducerea senescenţei cu ajutorul lui SIRT-1(silent information regulator-1). Acest lucru dovedeşte un mechanism de reglare al EPC mediată de miRNA(43).

                                    Implicarea în Carcinogeneză

Micro-RNA au roluri multiple în carcinogeneză

1) În timpul bolii canceroase, micro-RNA serice sunt derivate nu numai din celulele sanguine,dar şi din alte ţesuturi afectate de boală.(1).

2) Expresia serică a miRNA pare să fie implicată în tumorigeneză,în diviziunea celulară,în creşterea celulară şi în angiogeneza celulară(10).

3) Ele reglează o varietate de  de procese celulare ca, proliferarea, diferenţierea, metabolisml, senescenţa, moartea celulei.

    Dysreglarea expresie miRNA joacă un rol cheie în desvoltarea unor variate mecanisme ce includ deleţiile, amplificarea, tăcerea enzimatică sau mutaţii,dysreglarea factorilor de transcripţie,care ţintesc specific miRNA(39).

 4)Expresia miRNA poate fi folosită pentru a diferenţia normalul de ţesuturile canceroase. Sunt utile în clasificarea diferitelor tipuri de tumori şi diferitele grade.

5) Expresia miRNA se corelează cu prognosticul cancerului şi au un potenţial de a decide cursul tratamentului(44,45,46).

                                     MicroRNA şi Cancerul Pulmonar

MicroRNA circulanţi pot fi folosiţi ca markeri specifici pentru diferite tumori dar au o utilitate importantă în diagnosticul precoce(4).

Vă prezentăm rezultatul studiilor mai multor autori despre microRNA circulanţi(ser,plasmă, sânge integral) şi din ţesuturi.

                                           MICRO-RNA CIRCULANŢI

Micro-RNA serici.

-         Cancerul pulmonar fără celulel mici prezintă 63 de noi miRNA,care sunt absenţi la subiecţii normali.

S-au deosebit miRNA specifici, care includ:miR-205, miR-206, miR-335, miR1254 şi miR-574-5p(24).

      -     Foss et al(47) au arătat în ser prezenţa miR-1254 şi miR -574-5p,care au fost exprimaţi diferenţiat  la pacienţii NSCLC faţă de lotul normal. Eşantioaele tumorale în comparaţie cu lotul normal au arătat o sensibilitate de 82% faţă de control de 77%. şi o sensibilitate de 73% şi o specificitate de 71% la lotul de control. Combinaţia detectării acestor 2 microRNA este foarte utilă ca un biomarker pentru diagnosticul precoce şi pentru screeningul indivizilor cu risc înalt în Cancerul Pulmonar.

Autorii au arătat pentru prima dată că miR-1254 este crescut  în stadiul precoce Alţi

 autori au studiat miR -574-5p(7(48). Autorii lucrării(47) au comunicat că miR-574-5p

 este asociat cu  chimiorezistenţa în cancerul pulmonar cu cellule mici(48).

      -     Bianchi et al  au desvoltat un test bazat pe detecţia a 34 de miRNA din ser, care pot identifica pacienţii NSCLC în stadiul precoce al bolii,la pacienţii asimptomatici,dar care au un risc,cu o acurateţe de 80%(49).

     -    Hu et al au testat diferenţe în nivelul seric al miRNA la pacienţii NSCLC cu durată de viaţă lungă sau scurtă. Nivelul seric al miRNA a fost găsit alterat de 5 ori mai mult între cele 2 grupe(50)

MicroRNA circulanţi pot fi folosiţi  prin utilizarea sensibilităţii şi rezistenţei la medicamentele anti-canceroase.

             Nivelel serice a miRNA a 4 microRNA(miR-48b, miR30d, miR-1 şi miR-4 au fost semnificativ asociaţi  cu o supravieţuire globală, iar semnătura acestor 4 miRNA serveşte ca predicţie pentru supravieţuirea globală în NSCLC.

MicroRNA circulanţi pot fi folositori pentru utilizarea sensibilităţii şi rezistenţa la medicamentele anti-canceroase(10).

                                            MICRO_RNA  plasmatici

Wei et al au arătat că nivelul plasmatic al miR-21 a fost semnificativ mai mare la pacienţii NSCLC faţă  de normali în funcţie de sex şi vârstă. miR-21 este un biomarker circulant pentru diagnosticul precoce al NSCLC.(51)

Zheng et al  au arătat că nivelul plasmatic  al miR-158, miR-197 şi miR-182 sunt semnificativ mai mari cu valoare crescută  în NSCLC  stadiul I în comparaţie cu subiecţii normali. Combinaţia acestor 3 microRNA a arătat o sensibilitate de 81,33% şi o specificitate de 86,36% la pacienţii cu Cancer pulmonar în comparaţie cu lotul de control(52)).

Markou A et al(Lung Cancer 2013;81(30:388-391) au arătat că 3 microRNA( MiR-21, miR-10a şi miR-30c-5p) aveau expresii diferite faţă de lotul normal. Supra expresia miR-21 a fost asociată cu timpul fără recidivă şi cu supravieţuirea globală(OS), atât în ţesut cât şi în plasmă. miR-10aa fost asociat cu un scurt timp fără recidivă, iar supra expresia miR-30c-5p a fost asociată cu o supravieţuire globală(OS) de scurtă durată.

MicroRNA circulanţi  mir-21,miR-10a şi miR-30c-5p din plasmă sunt cei care trebuiesc, în continuare,evaluaţi ca biomarkeri non invazivi în cancerul pulmonar fără celule mici.

Sueoka E et al (Lung Cancer 2005;48(1);77-83) au găsit valori crescute în plasmă al unui biomarker hnRNPB1mRNA(heterrogenous nuclear ribonucleoprotein) în  Cancerul Pulmonar în  comparaţie cu valorile plasmatice de la bolile pulmonare benigne şi de la lotul de voluntari-respectiv-

0,99, 0,30,0,23 pg/microg/RNA.Deasemeni din punct de vedere histologic valorile cele mai înalte plasmatice al hnRNPb1mRNA s-au găsit în forma squamoasă în comparaţie cu Adenocarcinoml pulmonar.

                                         Micro RNA în sângele global

SANTOSH et al(53) au studiat pacienţii cu Adenocarcinom pulmonar(ADC) prin detectarea miRNA în sângele integral.

Din 1282 de micro-RNA au fost identificaţi 395 pacienţi cu ADC pulmonar(31%) iar 96 pacienţi (24%)au prezentat modificări ale prezenţei mico-RNA

S-a dovedit că microRNA pe nume-miR-190-b, miR- 630, miR -942 şi miR-1284 au fost mai frecvenţi la pacienţii cu ADC pulmonar.

                                               Micro RNA tisulari

În eşantioanele tisulare ale Cancerului Pulmonar s-au observat nivele înalte ale miR-128b, miR-152,miR-205, miR-27a, miR-146, mir-222, miR-23a miR-24, miR150(54).

Datele  de mai sus ne arată că în timpul bolii canceroase micro-RNA sunt derivate  nu numai din celulele sanguine circulante,dar şi din alte ţesuturi afectate de boală.

Autorii au examinat 50 de pacienţi( 30 suferinzi de NSCLC, 20 normali).

Expresia diferenţiată a miR-15b şi miR-27b despart cazurile cu NSCLC de normal.

Această pereche de microRNA are o specificitate de 84% şi o sensibilitate de 100%.

Această pereche de microRNA are un potenţial de detecţie precoce a NSCLC(13).

micro-RNA-15a şi microRNA-15b sunt dereglate în ţesuturile cancerului pulmonar((55).

Expresia  microRNA-27f a fost găsită subreglată în ţesutul canceros în comparaţie cu ţesutul sănătos.((56)

Keller et al(28)(57) au arătat că miR-126 şi miR-98 au fost cei mai utili în a deosebi  pacienţii   NSCLC  de subiecţii normali. Perechile miR-126 au arătat o sensibilitate peste 75% cu o specificitate mai mică de 75%.

MicroRNA-126 a fost foarte exprimat în ţesutul pulmonar şi este implicată în reglarea  VICAM-1(vascular cell adhesion molecule-1)(58))(. Perechile candidate miR-126 au arătat o sensibilitate de pest 75% şi o specificitate mai puţin de 75%.

                               Sinteza datelor microRNA în Cancerul Pulmonar

                                       MicroRNA circulanţi.

 Sunt diferenţe între pacienţii NSCLC şi normali. Sunt utili pentru depistarea  precoce a cazurilor cu risc de cancer pulmonar. Sunt utili pentru utilizarea sensibilităţii şi rezistenţei la medicamentele anti-canceroase.

                  1) MicroRNA circulanţi serici.

    miR-1254 şi miR -574-5p sunt exprimaţi diferenţiat la pacienţii NSCLC faţă de lotul normal. Sunt utili pentru diagnosticul precoce şi pentru screeningul indivizilor cu risc înalt de Cancer Pulmonar.

    Nivelul seric a 4 microRNA( miR-48b, miR-30d, miR-1 şi miR-4) sunt semnificativ asociaţi cu supravieţuirea globală.

                  2) MicroRNA circulanţi plasmatici

-miR-21 este un biomarker circulant  pentru diagnosticul precoce al NSCLC

-miR-158, miR-197,  şi miR-182 au valori mari în stadiul I al bolii.

-miR-21, miR-10a şi miR-30c-5p se asociază cu expresii diferite faţă de normal. Ei sunt astăzi cei mai  deosebiţi biomarkeri plasmatici non-invazivi în NSCLC.

                                            MicroRNA tisulari

În Cancerul Pulmonar au nivele înalte miR-128b, miR-152, miR-205, miR-27b, miR-146, miR-222, miR-23a, miR-24 şi miR-150.

Expresia diferenţiată  a miR-15b şi miR-27b deosebesc pacienţii NSCLC faţă de normali.

Deasemeni miR-126 şi miR-27b deosebesc pacienţii cu NSCLC.

miR-126 şi miR-98 au în NSCLC expresii diferite faţă de valorile normale şi deosebesc normalul faţă de pacienţii cu NSCLC şi par să fie cei mai utili.

În continuare trebuiesc ameliorate technicile de evidenţiere concomitentă a micro RNA

circulatorii, instituirea de protocoale şi  de continuat studiile clinice.

                                                         BIBLIOGRAFIE

1)      XI-CHEN, Yi-BA, LIJIA MA

Characterization of micro-RNAs in seru:a novel class of biomarker for diagnosis in cancer and other diseases

CELL Research 2008;18;997-1006

2)      DUFFY M.J

Clinical uses of tumor markers:a critical review

Crit. Rev. Clin. Lab. Sci  2001;38:225-262

3)      THOMAS C.M, SWEEP C.G

Serum tumor markers;past,state of the art and future

Int. J. Biol. Markers 2001;16:73-86

4)      DUFFY M.J

Role of tumor markers in patients with solid cancer: a critical review

EUR. J. INTERN MED 2007;18:175-184

5)      ROULSTON J.E

Limitations of tumor markers in sceening

Brt. J. Surgery 1990;77:961-962

6)      CALIN G.A, CROCE C.M

Micro/RNA signature in humans cancers

Nat. Rev. Cancer  2006;65:259-269

7)      LUQING ZHAO, XUE CHEN, YA KAO

New role of microRNA:carcinogenesis and clinical application in cancer

Acta Biochemica, Biophysic Sin 2011;43911):831-839

8)      BUSHATI N, COHEN S.M

MicroRNA functions

Ann. Rev Cell Dev Biol 2007;23:175-205

9)      FELEKKIS K, TOUVANA E, STEPHANO C.H et al

MicroRNAs: newly described class of encoded molecules that play a role in health and diseases

Hippokratia  2010;14:236-240

10)  RUIMIN MA, TAO JIANG, XIXIONG K et al

Circulating microRNA in cancer:origin,function, application

J. of Experimental & clinical cancer research 2012;31:38

11) SIOMI H, SIOMI M.C

Post transcriptional regulation of microRNA biogenesis in animals

MOLL. CELL  2010;38;323-332

12)  FRIEDMAN R.C, FAHR K.K, BURGE C.B, BARTEL D.P

Most mammalian mRNA are conserved targets of microRNA

GENOM. RESEARCH 2009;19:92-105

13)  PATRICK T. HENNESSY, TIFFANY Y. SANFORD, ASHISHI CHOUDHARY

Serum microRNA biomarkers for detection of non small cell lung cancer

PluS ONE 2012;7(5):10371

14)  MITCHELL P.S, PARKIN R.K, KROH E.M et al

Circulating microRNAs as stable blood-based markers for cancer detection

Proc. Natl. Acad. Sci. USA 2008;105:10513-10518

15)  HUBER K, KIRCHHEIMER J. C, ERMLER D et al

Determinationof plasma urokinase[type plasminogene activator antigen in patients with primary liver cancer;characterizationm as tumor-associated antigen and comparison with alpha-feto protein

Cancer research  1992;52;1713-1720

16)  DEFOS L.J

Chromogranin A: its role in endocrine function and as an endocrine and neuro-endocrine tumor marker.

17)  SANCHEZ-CARBAY M, HERRERO E, MEGIAS J t al

Evaluation of nuclear matrix protein 2 as a tumor marker in the detection of transitional cell carcinoma of the bladder

BJU INT 1999;84;706/713

18)  EINHORN N, SJOVALL K, KRAPP B.C et al

Prospective evaluation of serum CA 125 levels for early detection ovarian cancer

Obstret . gynecol. 1992;80;14-18

19)  ZAGRAS G K, von ESCHENBACH  A.L

Prostata specific antigen- an important marker for prostate cancer treated by external beam radiation therapy

CANCER 1993;72;538-548

20)  LENHARD M, TSVILINA A, SCHUMACHER L et al

Human chorionic gonadotropin and its relation to grade,stage and survival in ovarian cancer.

BMC CANCER 2012;12:2

21)  CHIM S.S, SHING T.K, HUNG E.C et al

Detection and characterization of placental microRNAs in maternal plasma

CLIN CHEM  2008;54;482-496

22)  RUIMIN MA, TAO JIANG, XIXIONG K et al

Circulating microRNAin cancer :origin, function,application

J. of experimental & clinical cancer research 2012;31:38

23) MITCHELL P.S, PARKIN R.K, KROH E.M et al
Circulating microRNAs as stable blood/based markers for cancer detection

Proc. Natl Acad SCI USA  2008;105:10513-10518

24)  CHEN X, BA Y, MA l et al

Characterization of microRNAs in serum; a novel class of biomarker for diagnosis

CELL RESEARCH 2008l;18;997-1006

25)  LUMA L.G, CHAMMAS R, MONTEIRO R. Q et al

Tumor-derived microvesicles modulate the establishment of metastatic melanoma in a phosphatidyl serine-dependent manner

CANCER LETT. 2009;283;168-175

26)  VALADI H.  EKSTROM K, BOSSIOS A.

Exosomes mediated transfer of mRNA and microRNA is a novel mechanism of genetic exchange berween cells

Natl. CELl BIOL 2007 ;9:654-659

27)  WANG K, ZHANG S, EWBER J et al

Export of microRNAs and microRNA protective protein by mammalian cells

Nucleic acid Research 2010l;38:7248-7259

28)  PIGATI L, YADSDANAPUDI S.C, Iyengar et a

Selective release of microRNA species from normal and maligned mammary epithelial cells.

PLOS ONE 2010;5:e13515

29)  IGUCHI H, KOSAKA N, OCHIYA T

Versatile application of microRNA in anti-cancer drud discovery:from therapeutics to biomarkers

Curr. Drug Discov.Technol 2010;7:95-105

30)  SCHAEFER A, JUNG M, KRISIANSEN G et al

MicroRNA and cancer:current state and future perspectives in urologic oncology

Urol. Oncol. 2010;28:4-13

31)  YEKTA S. SHIH I.H, BASRTEL DP

MicroRNA-directed clivage of HOXB8 mRNA

Science;2004;304: 594-596

32)  REINHART B.J, SLACK F.J, BASSON M

The 21-nucleotide LET-7RNA regulates developmental timing in CAENORHABDITIS ELEGANS

Nature200;403;901-906

33)  OLSEN P.H, AMBROS V

The LIN-4 regulatory RNA controls developmental timing in CAENOR HABBITIS ELEGANS by blocking LIN-14 prothein synthesis afteriniation of translation

Dev. Biol 1999;21:671-680

34)  LUI M, LI J, DING I et al

Micro/RNA and cancer

AAPSJ 2010;12:309-317

35)OLIVE J, JIANG I, HE L

miR 17/92 a cluster of miRNAs in the midlestmof the cancer network

Int. J. Biochem,Cell Biol  2010;42;1348-1354

36)  PETER  M.E

LET-7  and miR-200 microRNAs guardians against pluri/potency and cancer progression

Cell Cycle 2008;8;843-852

37)  DEWS M, HOMAYOUNI A, YU B et al

Augmentation of tumor angiogenesis by a MYC-activated microRNA cluster.

Nat. Genet. 2006;38:1060-1065

38)DOEBELE C, BONNAUER A, FISCHER A et al

Members of the microRNA-17-92 cluster exhibit a cell intrinsic antiangiogenic function in endothelial cells

Blood 2010;105;4944-4950

39)SUAREZ Y, SESSA W.C

MicroRNAs as novels regulators of angiogenesis

Circ. Research 2009;104:442-454

40)    URBICH C, KUEHBACKER A, DIMMELER S

Role of microRNAs in vascular diseases,inflammation andangiogenesis

Cardiovasc. Research 2008;79:581-588

41)    BLANDER G, GUARENTE L.P

The Sir-2 family of protein de acetylases

Annu Rev Biochem 2004;73: 581-588

42)    HAIGIS M.C, GUARENTE l.P

Mammalian SIRTUINS-emerging roles I physiology,agingand caloric restriction

Genes. Dev. 2006;20;2913-2921

43)    ZHAO T, LI J, CHEN A.F

MicroRNA -34a induces  endothelial progenitor cell senescence and impedes its angiogenesis,via suppressing Silent Information regulator-1

Am. J. Physiol,Endocrinol, Metab  2010;299: e 110-116

44)    SHELL S, PARK S.M, RADJABI et al

LET-7 expression defines two differentiation stages of cancer

Proc Natl Acad Sci USA 2007;104:11400-11403

45)    VISONE R, PALLANTE P, VECCHIONE A et al

Specific microRNAs are down regulated in human thyroid anaplastic carcinoma

Oncogene 2007;26: 7590-7595

46)    SARKA p.H, Li Y, WANG Z et al

Implication ogf microRNA resistance for designing novel cancer therapy

Drug. Resistance Updat 2010;13;57-66

47)    FOSS K.M, SIMA C, UGOLINI Q et al

miR-1254 and miR-574-5p: in serum-based microRNA biomarkers for early stage non small cell lung cancer

J. Thorac.Oncology 2011;6:482-488

48) KELLER  A, LEIDINGER P, BORRIES A et al

miRNAs in lung cancer-studying complex fingerprints  in patients blood cells by microarray experiments

BMC CANCER 2009;9: 353

49)  BIANCHI F, NICASSIO F, MARZI M et al

A serum circulating miRNA diagnostic test to identifiny asymptomatic high risk individuals with early stage lung cancer

EMBO MOL MED 2011;3;495-509

50)  HU Z, CHEN X, ZHAO Y

Serum microRNA signatures identified in a genome-wide serum microRNA expression profiling predict survival of non small cell lung cancer

J of Clin. Oncology 2010;28;1721-1726

51)  WEI J, GAO W, ZHU C.J et al

Identification of plasma microRNA-21 as a bomarker for early detection and chemosesitivity of non small cell lung cancer

CHINm j CANCER2011;30; 407-414

52)   ZHENG DALI,  SHADI  HADDADIN< YONG WANG et al

      Plasma microRNA as a novel biomarkers for early detection of lung cancer

      Int. j. Clin. Exp. Pathol 2011;4(6):575-586

53)  SANTOSH K. PATNAIK, SAI YENDAMURI, ERIC KANNIS et al

MicroRNA expression profiles of whole blood in lung adenocarcinoma

PLOS ONE 2012;7(9)-e46045

54)VOLINIA S, CALIN G.A, LIU C.G et al

A microRNA expression signatureof human solid tumors defines cancer gene target

PROC NATL ACAD SCI USA 2006;103:2257-2261

55)BANDI N, ZBINDEN S, GUGGLER M et al

miR 15a and miR/16 are implicated in cell cycle regulation in a Rb dependent- and manner and are frequently deleted or down/regulated in non small cell lung cancer

Cancer Research 2009;69:5553-5559

56)      YANAIHARA N, CAPLEN N, BOWMAN E et al

Unique microRNA molecular profilesin lung cancer diagnosis and prognosis

Cancer Cell 2006;9:189-198

57)      KELLER A, LEIDINGER,  BORRIES et al

miRNA-126, in lung cancer, studying coplex fingerprints in patients blood cells

by micro-array experiment

BMC CANCER  2009;9;313

58)      HARRIS T.A, YAMAKUKY< FERLITO M et al

microRNA-126 regulates endothelial expression of vascular cell  adhesion molecule

-1(VCAM-1)

                    EOZINOFILELE  si ASTMUL BRONCHIC

.